一、自發(fā)熒光淬滅試劑盒產(chǎn)品規(guī)格

備注：T表示可處理切片數(shù)量，適配5-15μm常規(guī)冰凍切片厚度。若切片厚度增加，可適當(dāng)增加試劑用量。

二、適用樣本類型及淬滅效果展示

動(dòng)物組織、植物根系等高自發(fā)熒光冷凍切片樣本；

含有外源性熒光雜質(zhì)的石蠟切片樣本。

組織冰凍切片樣本使用自發(fā)熒光淬滅試劑盒淬滅前vs 淬滅后測試效果圖

組織冷凍切片自發(fā)熒光淬滅效果等級(jí)評(píng)價(jià) 

三、自發(fā)熒光淬滅試劑作用原理

本試劑盒可針對(duì)性抑制與清除樣本中引發(fā)自發(fā)熒光的各類物質(zhì)：既能作用于內(nèi)源性脂溶性熒光物質(zhì)（如脂褐素）、內(nèi)源性過氧化物酶、膠原纖維、彈性纖維等自身熒光基團(tuán)，也可有效去除樣本預(yù)處理過程中產(chǎn)生的外源性非特異性熒光雜質(zhì)（如石蠟微晶、組織固定液殘留熒光物質(zhì)）。

試劑盒配備兩種熒光淬滅劑，既可單獨(dú)使用，也可協(xié)同增效，靶向清除自發(fā)熒光成分；全程不干擾探針雜交及后續(xù)熒光信號(hào)讀取，不影響實(shí)驗(yàn)核心流程，確保檢測結(jié)果真實(shí)可靠。

三、儲(chǔ)存條件

試劑盒未開封組分：2–8℃冷藏避光保存，嚴(yán)禁冷凍、高溫及強(qiáng)光照射。

嚴(yán)格遵循儲(chǔ)存要求，可有效保證試劑活性與淬滅效果。

配制后的工作液建議現(xiàn)配現(xiàn)用；若短期保存，可密封后于2–8℃冷藏避光儲(chǔ)存，并在48小時(shí)內(nèi)使用完畢。

四、產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)

多通道兼容：覆蓋FISH檢測常用熒光通道，一站式解決多熒光標(biāo)記樣本的自發(fā)熒光問題；

高效特異性：靶向清除自發(fā)熒光成分，不影響探針與靶標(biāo)結(jié)合，不干擾后續(xù)信號(hào)讀取；

適配性廣：適用于動(dòng)植物多類高自發(fā)熒光熒光的冷凍切片和石蠟切片切片，拓展性強(qiáng)；

操作靈活：兩種淬滅劑可單獨(dú)/協(xié)同使用，滿足不同樣本和切片類型的處理需求。

獲取產(chǎn)品詳細(xì)說明書、實(shí)驗(yàn)方案及報(bào)價(jià)信息，專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)為您解答實(shí)驗(yàn)難題！咨詢熱線：021-50763698

本產(chǎn)品僅供科研使用，不用于臨床診斷

FISH檢測石蠟切片自發(fā)熒光淬滅試劑盒

FISH檢測植物根系冷凍切片自發(fā)熒光淬滅試劑盒

FISH檢測組織冰凍切片自發(fā)熒光淬滅試劑盒

16S FISH檢測 自發(fā)熒光淬滅試劑盒，首發(fā)于微基生物。

Q1：凍干探針管上標(biāo)注的“2OD”是什么意思？如何快速換算成質(zhì)量濃度？

A：①“2OD”是核酸類探針合成時(shí)的光密度值，為定量單位而非質(zhì)量單位。（OD即光密度，1OD≈40μg/mLdsDNA），

②示例：若標(biāo)注為”To100μM，加50μL，總質(zhì)量100μg，WM：8000″

稀釋到25μM：需加4×50μL=200μL溶劑

質(zhì)量濃度：(100μg×1000ng/μg)÷200μL=500ng/μL

Q2：探針管上標(biāo)注的“WM（分子量）”有什么實(shí)際用途？實(shí)驗(yàn)中需要用到這個(gè)數(shù)值嗎？

A：分子量是合成過程中計(jì)算“特定濃度所需溶劑體積”的核心依據(jù)，客戶無需單獨(dú)使用該數(shù)值，直接按標(biāo)注的“To[目標(biāo)濃度]μM，加[Xμl]”操作即可，無需自行二次計(jì)算。

二、稀釋操作相關(guān)疑問

Q3：探針稀釋用無菌水還是TE緩沖液？兩者對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有影響嗎？

A：兩者均可，但各有側(cè)重：

無菌水：適合立即使用的探針（短期內(nèi)使用完，如1周內(nèi)使用）

TE緩沖液（pH8.0）：含Tris和EDTA，能穩(wěn)定pH并螯合Mg²⁺，顯著延長探針穩(wěn)定性，適合長期分裝保存。

推薦方案：優(yōu)先使用TE緩沖液，尤其是需多次使用的探針。

注意：TE緩沖液需用DEPC水配制，避免RNase污染。

Q4：稀釋時(shí)加錯(cuò)了溶劑體積（比如多加/少加），能補(bǔ)救嗎？

A：①少加溶劑（濃度偏高）：可根據(jù)“C1V1=C2V2”補(bǔ)加溶劑

例如：應(yīng)加200μL溶劑（目標(biāo)25μM），實(shí)際加了150μL，需補(bǔ)加溶劑體積=（25×200-25×150）/25=50μL（補(bǔ)加后總體積200μL，濃度恢復(fù)25μM）；

②多加溶劑（濃度偏低）：無法補(bǔ)救，因探針總質(zhì)量固定，多加的溶劑會(huì)稀釋總濃度，且無法分離多余溶劑，需重新合成探針或使用備用分裝液重新稀釋。

Q5：稀釋探針時(shí)，溶劑加完后需要怎么處理？是否需要離心或劇烈震蕩？

A：①加完溶劑后，輕輕顛倒離心管數(shù)次混勻即可，禁止劇烈震蕩（避免破壞探針的核酸鏈結(jié)構(gòu)和熒光基團(tuán)）；

②無需額外離心，若探針未完全溶解，可在室溫避光靜置5–10分鐘，再輕輕顛倒混勻，直至完全溶解（凍干探針溶解需要一定時(shí)間）。

三、濃度換算相關(guān)疑問

Q6：如何將25μM的存儲(chǔ)液稀釋到FISH試劑盒要求的10~15ng/μL工作濃度？

A：換算公式:

質(zhì)量濃度（ng/μL）=摩爾濃度（μM）×分子量（Da）×10^-3

示例：探針分子量WM=8000Da，說明書標(biāo)注稀釋為25μM

存儲(chǔ)液濃度=25×8000÷1000=200ng/μL

試劑盒要求10~15ng/μL，WM=8000Da

10ng/μL對(duì)應(yīng)的摩爾濃度=10×1000÷8000=1.25μM

15ng/μL對(duì)應(yīng)的摩爾濃度=15×1000÷8000=1.875μM

您需要將25μM的存儲(chǔ)液稀釋13~20倍（25÷1.25=20，25÷1.875≈13）

四、保存條件相關(guān)疑問

Q7：探針稀釋后分裝，每次取用時(shí)如何防止反復(fù)凍融和熒光淬滅？

A：反復(fù)凍融是導(dǎo)致探針降解和信號(hào)衰減的首要原因，分裝操作建議：

1.首次稀釋：按4X體積稀釋至25μM后，立即分裝為5-10μL/管（單次用量）；

2.保存：分裝后用錫紙包裹離心管，-20℃避光，避免放入自動(dòng)除霜冰箱的冷凍層；

3.取用：每次取1管，4℃避光當(dāng)天用完，盡量當(dāng)日使用完；若單管未用完，用鋁箔嚴(yán)密包裹后放4℃，24h內(nèi)用完，嚴(yán)禁二次凍存。

Q8:為什么推薦將探針稀釋到25μM作為存儲(chǔ)濃度，而不是直接用100μM存儲(chǔ)或使用？

A：25μM是兼顧“穩(wěn)定性”和“使用便利性”的最優(yōu)存儲(chǔ)濃度，在-20℃（短期）或-80℃（長期）保存時(shí)，可顯著延長探針的活性有效期。100μM濃度過高長期凍存容易發(fā)生分子間聚集甚至微量沉淀，導(dǎo)致有效濃度下降。

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FISH檢測試劑盒使用疑問解答

16S FISH探針定制使用相關(guān)疑問解答，首發(fā)于微基生物。

Q1：3種濃度的Hybridization Buffer（20%/30%/40%）該如何選擇？沒有明確方向，完全需要盲目摸索嗎？

A：濃度選擇取決于樣本類型和探針特性，以下選擇可供參考：

20%：適合細(xì)菌涂片、細(xì)胞懸液等簡單樣本（即樣本中目標(biāo)細(xì)菌含量較高）

30%：通用起始濃度，推薦首次測試使用，適用于大部分組織切片和常規(guī)探針

40%：適合復(fù)雜組織基質(zhì)（如腸道組織）、富含黏液的樣本，或需要嚴(yán)格雜交條件的探針（高濃度雜交液可提升特異性），樣本中細(xì)菌豐度低或土壤/污泥樣本（易出現(xiàn)非特異性雜交）可嘗試40%濃度。

Q2：Washing Buffer（10×）稀釋前是渾濁白色，稀釋后澄清有少量泡沫，這是正?，F(xiàn)象嗎？若稀釋前未搖勻會(huì)有什么影響？

A：屬于正?，F(xiàn)象。Washing Buffer是濃縮緩沖鹽溶液，長期靜置后溶質(zhì)會(huì)沉降分層。

說明書明確標(biāo)注“稀釋前必須搖勻，搖勻后呈渾濁白色液態(tài)，稀釋后變澄清且有少量泡沫”，操作建議：使用前劇烈搖晃1-2分鐘，確保護(hù)壁無結(jié)晶殘留（必要時(shí)可低溫加熱）。稀釋后泡沫屬正常現(xiàn)象，不影響性能。

若稀釋前未搖勻，會(huì)導(dǎo)致Washing Buffer中有效成分分布不均，后續(xù)洗滌時(shí)無法充分去除未結(jié)合的探針，可能造成熒光背景偏高，影響檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。

Q3：DAPI-Antifade Solution不小心見光了還能使用嗎？-20℃避光儲(chǔ)存的要求是否必須嚴(yán)格遵守？

A：①若短時(shí)間（如10分鐘內(nèi)）見光，可繼續(xù)使用，但熒光信號(hào)可能略有衰減；若長時(shí)間暴露在強(qiáng)光下（如半小時(shí)以上），不建議使用，因DAPI熒光基團(tuán)對(duì)光敏感，見光易淬滅，會(huì)導(dǎo)致后續(xù)染色效果變差。

② 必須嚴(yán)格遵守-20℃避光儲(chǔ)存要求，否則會(huì)加速熒光基團(tuán)降解，直接影響最終鏡檢時(shí)的熒光信號(hào)強(qiáng)度。

Q4：FISH封片劑的“指示效果”具體是指什么？

A：該封片劑的核心功能是：

物理隔絕：雜交期間防止Hybridization Buffer蒸發(fā)，維持濕潤環(huán)境。

化學(xué)保護(hù)：含特殊保濕成分，避免蓋玻片下液體干涸導(dǎo)致探針局部濃度過高。

操作指示：其顏色標(biāo)記便于識(shí)別封片位置，移除時(shí)不易殘留。

該染色劑不與細(xì)菌或探針發(fā)生相互作用，因此不會(huì)干擾檢測結(jié)果。

二、自備物品相關(guān)疑問

Q5：FISH熒光探針濃度范圍只能是10~15 ng/μL嗎？

A：濃度建議控制在10~15 ng/μL：濃度過低會(huì)導(dǎo)致雜交信號(hào)弱，難以檢測；濃度過高易引發(fā)非特異性結(jié)合，增加背景熒光，

探針濃度與雜交時(shí)間成反比關(guān)系，高濃度需縮短時(shí)間防止非特異性結(jié)合。

Q6：二甲苯的替代品有哪些？有沒有推薦的安全替代品？

A：可選擇常用的環(huán)保脫蠟劑（如檸檬烯脫蠟劑、植物源脫蠟液等），但需滿足以下要求：

① 脫蠟效果與二甲苯相當(dāng)，能徹底去除石蠟切片中的石蠟成分；

② 不影響后續(xù)探針雜交和熒光信號(hào)。

使用前建議先做小樣本驗(yàn)證，確認(rèn)脫蠟后樣本組織形態(tài)完整、無損傷。

Q7：沒有現(xiàn)成的避光濕盒，該如何自制？

A：①密封性好的塑料盒或培養(yǎng)皿，底部鋪一層浸濕的濾紙（注意保持濕度，避免干涸）；

② 用錫紙將盒子整體包裹（實(shí)現(xiàn)避光作用）；

③ 放入樣本玻片時(shí)，確保玻片水平放置，避免雜交液流淌。

注意：濕盒內(nèi)濕度需充足，雜交過程中不可打開錫紙（防止強(qiáng)光照射）。

三、實(shí)驗(yàn)操作相關(guān)疑問

Q8：不同類型樣本的預(yù)處理（烤片、脫蠟）時(shí)間/溫度是否有相關(guān)的調(diào)整建議？

A：預(yù)處理的核心是“去除雜質(zhì)、固定樣本形態(tài)”，參考建議：

Q9：Solution A和Solution B的處理時(shí)間如何根據(jù)具體樣本進(jìn)行調(diào)整？

A：調(diào)整基本原則“樣本越厚、老化程度越高，處理時(shí)間越長”，調(diào)整參考建議：

Solution A（37℃）：薄標(biāo)本（如薄冰凍切片、細(xì)胞涂片）保持10-15min；厚標(biāo)本（如厚石蠟切片、土壤涂片）延長至15-20min。

Solution B（37℃）：常規(guī)樣本15-20min；厚標(biāo)本或老化標(biāo)本延長至20-25min；若樣本中細(xì)菌細(xì)胞壁較厚（如革蘭氏陽性菌為主），可按25-30min處理。

Q10：雜交過夜時(shí)間范圍18-72h差異大，如何確定最佳時(shí)長？

A：調(diào)整基本原則是“樣本菌體含量越少、復(fù)雜程度越高，雜交時(shí)間越長”，參考建議：

常規(guī)樣本（新鮮組織、活躍菌群涂片）18-24h即可；

低豐度細(xì)菌樣本（如罕見菌檢測、低污染樣本）可延長至48h；

極難雜交的樣本（如休眠細(xì)菌、厚壁菌）可延長至72h，無需擔(dān)心“過度雜交”（本試劑盒雜交體系穩(wěn)定性強(qiáng)，72h內(nèi)不會(huì)出現(xiàn)非特異性過度結(jié)合）。

Q11：洗滌時(shí)蓋玻片3-5min未自動(dòng)脫落，能手動(dòng)取下嗎？Washing Buffer工作液未預(yù)熱到37℃，會(huì)有影響嗎？

A：①不建議手動(dòng)取下，手動(dòng)取蓋玻片易刮傷樣本組織或蹭掉已結(jié)合的探針，若3-5min未脫落，可將玻片在1×Washing Buffer工作液中輕輕晃動(dòng)1-2次，促進(jìn)蓋玻片脫落，仍未脫落則延長浸泡時(shí)間至5-8min；

② 有影響：Washing Buffer工作液預(yù)熱至37℃是為了維持雜交后的穩(wěn)定環(huán)境，有效去除未結(jié)合的探針；若溫度過低（如室溫25℃以下），未結(jié)合的探針難以脫離，會(huì)導(dǎo)致背景熒光偏高，因此需將工作液預(yù)熱至37℃再使用。

Q12：DAPI-Antifade Solution滴加后靜置15min，若時(shí)間不夠會(huì)怎樣？滴加多少合適？

A：①靜置時(shí)間不夠會(huì)導(dǎo)致DAPI染色不充分，細(xì)菌細(xì)胞核熒光信號(hào)弱，難以觀察到細(xì)菌的定位；若已不足15min，可在暗處補(bǔ)靜置5min后再鏡檢；

②滴加量以“剛好覆蓋樣本表面”為宜，無需過多（避免溢出浪費(fèi)），也不能過少（未覆蓋區(qū)域無法染色），滴加后立即蓋蓋玻片（避免見光）。

四、結(jié)果分析類

Q13：背景熒光過強(qiáng)，如何區(qū)分是自發(fā)熒光還是非特異性雜交？

A：自發(fā)熒光：全通道均勻高亮，無探針的陰性對(duì)照也出現(xiàn)，常見于腸道組織、土壤樣本中。

非特異性雜交：特定探針熒光通道出現(xiàn)點(diǎn)狀或片狀信號(hào)，陰性對(duì)照無此現(xiàn)象。

操作建議：實(shí)驗(yàn)過程中增加空白對(duì)照（無探針）檢測，用于排除是否為樣本自發(fā)熒光情況。

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16S FISH探針定制使用相關(guān)疑問解答

FISH檢測試劑盒使用疑問解答，首發(fā)于微基生物。

微基生物依托熒光原位雜交（FISH）技術(shù)，提供植物根際微生物專業(yè)化 FISH 檢測與冷凍切片制備服務(wù)，無需復(fù)雜培養(yǎng)即可實(shí)現(xiàn)原位定位分析，最大程度保留根際微環(huán)境中微生物的真實(shí)群落結(jié)構(gòu)與分布情況。

一、FISH檢測服務(wù)核心原理

熒光原位雜交（FISH）技術(shù)基于核酸分子雜交原理，針對(duì)根際樣本中目標(biāo)功能微生物（如固氮菌、解磷菌、植物促生菌等）的 16S rRNA 或功能基因序列，設(shè)計(jì)特異性互補(bǔ)熒光標(biāo)記探針；探針與樣本中目標(biāo)微生物核酸在適宜條件下特異性結(jié)合過熒光顯微鏡或熒光掃描設(shè)備在細(xì)胞/組織原位觀察熒光信號(hào)，實(shí)現(xiàn)微生物的精準(zhǔn)定性，清晰反映根際微環(huán)境中微生物的空間分布與群落結(jié)構(gòu)特征。

二、 FISH 檢測服務(wù)內(nèi)容

1.根際微生物 FISH 檢測

針對(duì)植物根系及根際土壤微生物群落，開展樣本前處理、探針雜交、熒光成像與圖像分析全流程，清晰解析微生物在根系表面、根內(nèi)的定殖位點(diǎn)及豐度特征，可檢測根際促生菌（PGPM）、固氮菌、溶磷/溶鉀菌等功能微生物的定殖能力與持久性。

注：圖中紅色熒光信號(hào)為根際細(xì)菌（EUB338通用探針標(biāo)記），綠色信號(hào)為特定PGPM（定制探針標(biāo)記），展示微生物在根表及根毛區(qū)的聚集分布（參考 Watt et al., 2006 小麥根FISH成像方法）。

2.多技術(shù)聯(lián)合檢測（定制化）

整合傳統(tǒng)分離培養(yǎng)方法（選擇性/富集培養(yǎng)基篩選）與qPCR、高通量測序等分子生物學(xué)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)微生物“可培養(yǎng)類群鑒定+原位分布分析+群落整體多樣性解析”的全方位檢測，顯著提升微生物檢出率，全面還原植物微生態(tài)群落的結(jié)構(gòu)與功能。

注：基于Romano et al., 2020提出的多方法聯(lián)合評(píng)估框架優(yōu)化設(shè)計(jì)，實(shí)現(xiàn)微生物定殖與持久性的綜合分析。

三、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

1.原位精準(zhǔn)定位：無需分離培養(yǎng)，直接在根際微環(huán)境中定位目標(biāo)微生物，真實(shí)反應(yīng)器空間分布與互作關(guān)系。

2.探針高特異性：基于16S rRNA序列設(shè)計(jì)特異性探針，精準(zhǔn)靶向特定功能微生物或微生物類群。

3.技術(shù)兼容性：可與分離培養(yǎng)、qPCR、高通量測序等技術(shù)聯(lián)用，實(shí)現(xiàn)微生物群落的多維度分析。

4.樣本適用范圍廣：適用于農(nóng)作物、模式植物、林木等的根、葉等組織及相關(guān)土壤樣本。

5.抗干擾能力優(yōu)： 自主研發(fā)植物組織樣本自發(fā)熒光淬滅試劑盒，專項(xiàng)解決植物根系樣本高自發(fā)熒光干擾問題。

四、樣本采集

1.根際土壤樣本

收集緊密附著在根表 1–2mm 范圍內(nèi)的根際土壤，裝入無菌離心管，采集量為2–5g。

2. 根表微生物樣本（洗脫液 / 根段）

·  根表洗脫液：取 1–2cm 長的新鮮根段，置于含無菌 PBS 緩沖液的離心管中，充分振蕩洗脫根表微生物，收集洗脫液后離心沉淀（建議沉淀量≥5mg）；

·  根段樣本：直接取 1–2cm 根段，立即置于 4% 多聚甲醛固定液中，4℃，避光保存。

五、服務(wù)流程

1.樣本接收與前處理：接收客戶提交的根際樣本，去除植物組織碎片、雜質(zhì)等干擾物，完成樣本均質(zhì)化處理。

2.樣本固定：采用專用固定液處理樣本，維持微生物細(xì)胞形態(tài)與核酸完整性。

3.冷凍切片/土壤涂片：對(duì)固定后的根系組織樣本或土壤樣本進(jìn)行合適的樣片制備。

4.熒光原位雜交：加入定制化熒光探針，在嚴(yán)格控溫條件下完成核酸雜交反應(yīng)。

5.熒光圖像掃描：通過專業(yè)的熒光掃描設(shè)備，對(duì)雜交后的樣本進(jìn)行掃描成像。

6.結(jié)果分析與報(bào)告：對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行定性定量分析，生成可視化結(jié)果與專業(yè)檢測報(bào)告。

檢測結(jié)果展示

植物根系縱向切片展示

植根系縱向切片展示

藍(lán)色熒光（DAPI染色）：呈現(xiàn)根系樣本中所有細(xì)菌的整體分布；紅色熒光（FISH探針標(biāo)記）：定位目標(biāo)功能微生物。圖像疊加可直接觀察目標(biāo)菌在總?cè)郝渲械奈恢门c占比，快速判斷目標(biāo)菌的存活狀態(tài)與富集情況。

歡迎科研機(jī)構(gòu)、農(nóng)業(yè)研發(fā)企業(yè)前來咨詢合作，我們將為您提供專業(yè)的根際/葉際微生物 FISH檢測解決方案，助力植物微生物組研究與綠色農(nóng)業(yè)發(fā)展。

參考文獻(xiàn)：

1. Peredo, E.L., & Simmons, S.L. (2018). Leaf-FISH: Microscale Imaging of Bacterial Taxa on Phyllosphere. Frontiers in Microbiology, 8: 2669.

2. Romano, I., Ventorino, V., & Pepe, O. (2020). Effectiveness of Plant Beneficial Microbes: Overview of the Methodological Approaches for the Assessment of Root Colonization and Persistence. Frontiers in Plant Science, 11: 6.

3.Watt, M., Hugenholtz, P., White, R., & Vinall, K. (2006). Numbers and locations of native bacteria on field-grown wheat roots quantified by fluorescence in situ hybridization (FISH). Environmental Microbiology, 8(5): 871-884.

根際微生物 切片&16S FISH檢測服務(wù)，首發(fā)于微基生物。

微基生物IF-FISH共檢測服務(wù)，創(chuàng)新融合FISH與IF優(yōu)勢(shì)：以微生物特異性核酸探針（如16S rRNA探針）實(shí)現(xiàn)對(duì)微生物的精準(zhǔn)定位與定性，明確其定植區(qū)域及聚集狀態(tài)，同時(shí)借特異性抗體標(biāo)記，量化宿主目標(biāo)蛋白表達(dá)并解析細(xì)胞功能，實(shí)現(xiàn)微生物定位、活性及宿主互作的多維解析。

服務(wù)流程

實(shí)驗(yàn)關(guān)鍵注意事項(xiàng)

1.探針-抗體兼容性優(yōu)化：針對(duì)不同抗體的孵育溫度、時(shí)間、濃度參數(shù)，定制專屬雜交方案，避免交叉干擾，確保雙重信號(hào)高效捕獲。客戶需提供抗體。

2.嚴(yán)格質(zhì)控體系：設(shè)置陽性對(duì)照（已知陽性樣本）、陰性對(duì)照（無探針孵育組）、探針特異性對(duì)照及抗體陰性對(duì)照，嚴(yán)格優(yōu)化雜交溫度、洗脫強(qiáng)度等條件，確保特異性信號(hào)檢測。

3.多通道檢測支持：支持4色熒光通道同步檢測（含DAPI染核通道），可同時(shí)標(biāo)記3種目標(biāo)微生物，滿足復(fù)雜實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)需求。

4.樣本質(zhì)量要求：石蠟切片需經(jīng)梯度脫蠟確保探針穿透性，冰凍切片快速固定防止組織自溶，菌液/涂片樣本優(yōu)化分散度避免聚集影響觀察。

樣本類型與檢測周期   

支持樣本：冰凍切片、石蠟切片、菌液/菌體涂片、活性淤泥樣本等

檢測周期：實(shí)驗(yàn)材料（樣本、抗體、探針等）備齊后2-4周，具體以合同約定為準(zhǔn)

文獻(xiàn)分享 

腫瘤內(nèi)微生物促進(jìn)乳腺癌轉(zhuǎn)移機(jī)制研究

（文獻(xiàn)來源：Fu A K, Yao B Q, Dong T T, et al. Tumor Resident Intracellular Microbiota Promotes Metastatic Colonization in Breast Cancer〔J〕. Cell, 2022）

1.檢測方法：

采用FISH與IF共檢測技術(shù)，以16S rRNA FISH探針標(biāo)記細(xì)菌，結(jié)合角蛋白8+18、LPS、LTA 等特異性抗體，同步實(shí)現(xiàn)微生物定位與宿主細(xì)胞/蛋白標(biāo)記，搭配DAPI染核完成多維度觀測。

2.關(guān)鍵檢測結(jié)果與圖像解析：

1）腫瘤組織中微生物定位

16S FISH與IF共染色證實(shí)，腫瘤內(nèi)細(xì)菌主要定植于腫瘤細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，核周區(qū)域呈點(diǎn)狀分布，且同時(shí)存在革蘭氏陽/陰性菌，證實(shí)腫瘤組織存在穩(wěn)定定植的微生物群落。

(A) 16S FISH分析（紅色）顯示細(xì)菌在核周區(qū)域呈點(diǎn)狀分布；(B) LPS IHC染色（革蘭氏陰性菌，紅色）；(C)LTA染色（革蘭氏陽性菌，紅色），藍(lán)色為DAPI染核。

2）肺轉(zhuǎn)移灶中微生物分布

肺轉(zhuǎn)移灶區(qū)域富集大量細(xì)菌信號(hào)，正常肺組織中細(xì)菌信號(hào)極少，證明腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移時(shí)會(huì)攜帶微生物定植于遠(yuǎn)端器官。

(F)16S FISH分析帶有PyMT腫瘤轉(zhuǎn)移的肺組織切片。

(G) 血液中角蛋白8+18抗體和16S探針染色和定量循環(huán)腫瘤細(xì)胞中的細(xì)菌。

注：紅色-16S FISH 探針，藍(lán)色-DAPI，綠色-腫瘤細(xì)胞標(biāo)志物。

微基生物憑借專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì)、標(biāo)準(zhǔn)化的實(shí)驗(yàn)流程、先進(jìn)的檢測設(shè)備及豐富的項(xiàng)目經(jīng)驗(yàn)，為您提供優(yōu)質(zhì)的微生物FISH與IF共檢測服務(wù)。我們將全程為您提供技術(shù)支持，從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到結(jié)果解讀一站式解決，助力您在科研道路上快速突破、成果斐然！

微生物FISH與IF共檢測，首發(fā)于微基生物。