人體樣本的采集保存方法

根據(jù)實(shí)驗(yàn)的目的，確定選擇受試者的條件，如年齡、體重、身體健康狀況、有無特殊疾病等因素。根據(jù)考慮的因素，選擇符合條件的受試者。向受試者交代實(shí)驗(yàn)的目的、過程、風(fēng)險、收益及退出機(jī)制等，確保受試者理解全部實(shí)驗(yàn)內(nèi)容， 待受試者簽訂知情同意書后開始取樣

 1 樣本的采集

1.1 人糞便樣本的采集

讓受試者將糞便排泄到干凈的容器中，盡量避免尿液、馬桶壁等對糞便樣本的污染。糞便要采集新鮮的，建議采集排泄中后部的糞便，并盡量挖取中部內(nèi)側(cè)的糞便作為樣本。用無菌勺對新鮮的糞便進(jìn)行挖取，將糞便樣本放入無菌保存管中，樣本需 1g 左右。采集好的樣本立刻放入-80℃冰箱進(jìn)行低溫保存。

1.2 小鼠糞便樣本的采集

對于小鼠糞便樣本的采集，建議采用拎尾法進(jìn)行采集。小鼠排便后用滅菌的鑷子夾取小鼠糞便，樣本通常需 0.2g 以上，最少不低于 0.05g。樣本采集后立刻放入-80℃冰箱進(jìn)行低溫保存，如果樣本珍貴，需要進(jìn)行備份。

1.3 牙菌斑樣本的采集

受試者無其他口腔疾病，無家族遺傳疾病，無系統(tǒng)性疾病，無長期服藥史， 近 3 個月內(nèi)未服用抗生素服及免疫抑制劑。

取樣前天晚上不要刷牙，第二天早上在未進(jìn)食前取樣。首先用無菌生理鹽水沖洗收集區(qū)，棉卷隔濕，之后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模貌杉米臃謩e采集牙齒的舌面、 唇面、齲齒損傷區(qū)等部位的牙菌斑。采集時，建議由同一操作者進(jìn)行牙菌斑的采集操作。采集時在采集部位來回刮擦 3-4 次，之后翻轉(zhuǎn)采集拭子，在同一部位繼續(xù)進(jìn)行刮擦 3-4 次，每個樣本均采用一個采集拭子進(jìn)行采集。采集完成后，將帶有牙菌斑的采集拭子置于含有 1ml TE 溶液的無菌保存管中，掰斷采集拭子后， 對保存管進(jìn)行封口。置于冰上，待樣本采集完后，盡快轉(zhuǎn)移至實(shí)驗(yàn)室，放入-80℃ 冰箱進(jìn)行保存。

1.4 唾液樣本的采集

建議采集早上、未進(jìn)食的受試者的唾液，若受試者吃過飯，則需在飯后 2 小時后再進(jìn)行采樣。采集前，先讓受試者用 20mL 生理鹽水漱口 1min，之后自然口含唾液數(shù)分鐘后，由同一名操作者將滅菌 EP 管置于受檢者下唇口腔黏膜，使唾液自然流入，采集非刺激性唾液樣本 3ml，冷藏，放入-80℃冰箱進(jìn)行保存。

1.5 皮膚樣本的采集

受試者一周內(nèi)不能使用任何抗生素類和甾醇類產(chǎn)品，采樣前 12 小時內(nèi)不能在采樣部位上使用任何清潔用品（包括水洗）或護(hù)膚品，在采樣前經(jīng)醫(yī)生檢查并未患有特殊的皮膚病。

用采集拭子采集皮膚表面的微生物，取樣時，握拭子的手請靠近拭子頭部， 請勿超過折斷處，以免污染樣本。正常皮膚建議取樣面積采用 5cm*5cm，最小取樣面積需大于 4cm* 4cm。裸露皮膚（臉、手）微生物較為豐富，遮蓋部位（腹 部、小腿）皮膚微生物數(shù)量較少，需適度加大取樣面積。采集時，可將目標(biāo)區(qū)域按從上至下分為 4 個長方形區(qū)域，保持拭子頭與皮膚適度貼合，依次在每個區(qū)域往復(fù)擦拭 5 次以上；擦拭完一個區(qū)域后，務(wù)必將拭子旋轉(zhuǎn) 90 度，再擦拭下一個區(qū)域，以確保整個拭子都能結(jié)合到足夠的微生物樣本。如果需采集有傷口或發(fā)炎有膿的皮膚樣本，則在傷口或膿組織處直接取樣。皮膚患處微生物一般較為豐富， 但過多的膿液、組織液會為后繼的微生物基因檢測帶來一定干擾。建議同一個取樣部位使用 2 根采集拭子，一根采集拭子的樣本進(jìn)行測序，另一份進(jìn)行備份。

采集完成后，將采集拭子頭折斷放入保存管中。每一個采集拭子放入單獨(dú)一個保存管。將帶有樣品的保存管放入-80℃冰箱進(jìn)行冷凍存儲。待全部樣品采集好后，將帶有樣品的保存管放入冰盒中寄送到檢測機(jī)構(gòu)。

若無法實(shí)現(xiàn)低溫保存，可以采用微基生物研發(fā)的微生物 DNA 常溫保存液， 可以實(shí)現(xiàn)微生物樣本的常溫保存和運(yùn)輸。

 2 樣本的保存和寄送

將樣本放入-80℃冰箱進(jìn)行低溫保存，若條件不允許，可短期（1 個月內(nèi)）在-20℃冰箱中冷凍保存。注意在樣本凍存期間，請勿反復(fù)凍融。

送樣時請盡量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保證運(yùn)輸過程中的低溫條件（干冰的揮發(fā)消耗量約為 3 公斤/天）。在打包時先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中間的空隙。最近天氣較為炎熱，建議采用厚一點(diǎn)的泡沫盒。