土壤的采集保存方法

1 樣品的采集

采樣土壤樣品需要準(zhǔn)備的物品:取樣鏟，土鉆，鋼尺，卷尺，記號(hào)筆，中性筆，記錄本，滅菌自封袋，滅菌牛皮紙，滅菌的螺口管、干冰（儲(chǔ)能冰袋或冰袋），塑料泡沫盒，膠帶。

為了充分反映實(shí)驗(yàn)區(qū)的土壤情況，在采集土壤樣本時(shí)，至少需要3個(gè)重復(fù)， 即在實(shí)驗(yàn)區(qū)的3個(gè)地點(diǎn)分別取樣，3個(gè)地點(diǎn)之間需要保持一定距離。為了避免空氣中微生物的污染，一般采集土壤表層 5-20cm 處土壤樣品。具體的取樣深度需 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行選擇確定。在取樣前，需要先用取樣鏟將土壤表層的浮土和雜草去除。如果土樣較深，可采用土鉆對土壤樣品進(jìn)行采集。將采集好的土壤樣本過 2mm 的土壤篩，出去土壤中細(xì)根、石子、蟲子等雜物。若土壤樣本粘性較大， 可用鑷子去除樣本中的雜物。將采集好的土壤樣本，放入準(zhǔn)備好的無菌的自封袋、牛皮紙或螺口管等。寫好編號(hào)，做好記錄。每個(gè)樣本需提供 1-2g 土壤樣 本。

為了防止微生物死亡或者 DNA 降解，采樣后建議立即冰凍保存。有條件的，可以將樣品放入帶有干冰的泡沫盒中保存，若沒有干冰，可以用冰袋代替。之后迅速運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，放入-80℃進(jìn)行保存。

如果無法實(shí)現(xiàn)干冰、-80℃等低溫條件，可采用微基生物研發(fā)的土壤微生物常溫保存套裝（樣本保存液和采樣耗材），可以實(shí)現(xiàn)土壤樣本微生物DNA的常溫保存和運(yùn)輸。

2 樣本的保存和寄送

若在樣本采集現(xiàn)場無法實(shí)現(xiàn)對樣本中雜物的去除工作，回到實(shí)驗(yàn)室后，盡快將土壤樣品中的石頭、植物根系、蟲子等剔除，然后將土樣放入-80℃冰箱中進(jìn)行儲(chǔ)存。如果實(shí)驗(yàn)室中沒有-80℃的冰箱，可以將樣品放到-20℃冰箱短期（1 個(gè) 月內(nèi)）保存。在保存期間，避免反復(fù)凍融。

為了真實(shí)的反應(yīng)土壤中微生物多樣性，取樣后，應(yīng)盡快送到公司進(jìn)行檢測。 通過查閱相關(guān)文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，土壤樣品采集后放入-20℃冰箱低溫凍存 4 個(gè)月，土壤微生物群落的多樣性大大降低。

送樣時(shí)請盡量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保證運(yùn)輸過程中的低溫條件（干冰的揮發(fā)消耗量約為 3 公斤/天）。在打包時(shí)先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中間的空隙。為了保持較好的低溫效果，建議采用厚一點(diǎn)的泡沫盒。

 參考文獻(xiàn)

（1） Wang N, Zhang T, Zhang F, et al. Diversity and structure of soil bacterial communities in the Fildes Region (maritime Antarctica) as revealed by 454 pyrosequencing. Frontiers in Microbiology, 2015 (6): 1-11.

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