肺部灌洗液的采集保存方法

 1 樣本的采集

對擬要灌洗肺段經(jīng)活檢孔灌注2%利多卡因 1~2ml，做擬灌洗肺段局部麻醉。 將纖維支氣管鏡插入右肺中葉或左肺舌段的支氣管，將其項端楔入支氣管分支開口，經(jīng)氣管活檢孔緩緩注入37℃滅菌生理鹽水，每次 30-50 毫升，總量 100-250 毫升，不應(yīng)超過 300 毫升。每次注液后以-13.3~-19.95kpa 負壓吸引裝置吸引、回收至無菌痰液收集器中。一般回收率應(yīng)達注入液量的 40%-60%。

回收液用雙層無菌紗布過濾，除去粘液和較大雜質(zhì)，記錄總回收液量，收集裝入離心管（50ml 細胞培養(yǎng)用無菌螺口管）或其他無菌容器中，置于冰水（0℃）中送到實驗室。

在實驗室中對灌洗液進行處理。以 400g 的速度常溫離心 10 分鐘，底部沉淀是細胞團，上清是含有細菌的懸濁液。盡量避免攪起底部細胞團，將上清轉(zhuǎn)移到高速離心管中。若上清液較多，分多次離心收集與高速離心管中；之后以10,000g 速度離心 10 分鐘，小心棄去上清。用 1ml 無菌的 PBS 或生理鹽水，充分沖洗高速離心管底部，重懸高速離心管中的沉淀物（微生物）。將 1ml 洗滌液轉(zhuǎn)移到 1.5ml 螺口管或 EP 管之中，做好標記（防止擦花），可放于-80度冰箱長期凍存（超過 1 年），或短期（1 月內(nèi)）放于-20度冰箱中。

 2 樣本的保存和寄送

將樣本放入-80℃冰箱進行低溫保存，若條件不允許，可短期（1 個月內(nèi)）在 -20℃冰箱中冷凍保存。注意在樣本凍存期間，請勿反復(fù)凍融。 送樣時請盡量使用冰盒（泡沫盒+干冰+冰袋），以保證運輸過程中的低溫條件（干冰的揮發(fā)消耗量約為 3 公斤/天）。在打包時先放入足量的干冰，之后用冰袋填充泡沫盒中間的空隙，為了保持冰盒中的低溫環(huán)境，建議采用厚一點的泡沫盒。