菌株特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)

高特異性、高靈敏度、全流程服務(wù)，助力微生物檢測(cè)與定量

 

服務(wù)簡(jiǎn)介 

針對(duì)特定微生物菌株定量檢測(cè)，微基生物提供基于全基因組序列的菌株特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)、合成及驗(yàn)證服務(wù)，確保探針/引物的高特異性和擴(kuò)增效率，滿足復(fù)雜微生物群落背景下的單菌株檢測(cè)需求。

服務(wù)亮點(diǎn) 

1.高特異性與靈敏度

全基因組比對(duì)和優(yōu)化設(shè)計(jì)，確保引物/探針僅與目標(biāo)序列高度匹配，避免非特異性擴(kuò)增。

2.靈活的檢測(cè)方法

提供qPCR探針?lè)ê鸵旱螖?shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)方案，滿足不同樣本類型和研究需求。

3.全流程服務(wù)

數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建到引物/探針設(shè)計(jì)、驗(yàn)證與優(yōu)化，再到大規(guī)模檢測(cè)，一站式解決實(shí)驗(yàn)需求。

4.可靠的數(shù)據(jù)支持

嚴(yán)格的質(zhì)量控制和優(yōu)化流程，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可重復(fù)性。

服務(wù)流程 

1.數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建

通過(guò)查詢菌株的序列信息，構(gòu)建該菌株的全基因組數(shù)據(jù)庫(kù)。

2.特異性引物/探針設(shè)計(jì)

利用生物信息學(xué)工具，設(shè)計(jì)針對(duì)目標(biāo)菌株的特異性引物或探針。

3.驗(yàn)證及優(yōu)化

合成設(shè)計(jì)好的引物，并進(jìn)行特異性、擴(kuò)增效率等驗(yàn)證和優(yōu)化。

4.大規(guī)模檢測(cè)

使用驗(yàn)證通過(guò)的引物進(jìn)行菌株特異性進(jìn)行大規(guī)模檢測(cè)。

檢測(cè)方法 

1.TaqMan qPCR探針?lè)?/span>

利用與目標(biāo)菌株核酸序列特異性結(jié)合的探針，提高檢測(cè)靈敏度和特異性。

驗(yàn)證方法：通過(guò)分析特異性、靈敏度和重復(fù)性來(lái)驗(yàn)證引物和探針。使用已知含目標(biāo)菌株DNA的樣本檢測(cè)特異性；稀釋目標(biāo)DNA模板測(cè)靈敏度；重復(fù)實(shí)驗(yàn)計(jì)算Ct值和標(biāo)準(zhǔn)差評(píng)估重復(fù)性。

3.ddPCR定量檢測(cè)

將反應(yīng)體系分割成大量納升液滴，每個(gè)液滴獨(dú)立進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過(guò)陽(yáng)性和陰性液滴數(shù)量比計(jì)算目標(biāo)核酸絕對(duì)拷貝數(shù)。

驗(yàn)證方法：通過(guò)與傳統(tǒng)培養(yǎng)法或qPCR法比較驗(yàn)證ddPCR引物和探針。將ddPCR結(jié)果與培養(yǎng)法計(jì)數(shù)結(jié)果比較，評(píng)估準(zhǔn)確性；與qPCR法比較，分析相關(guān)性和一致性，同時(shí)分析重復(fù)實(shí)驗(yàn)液滴數(shù)量分布和標(biāo)準(zhǔn)差評(píng)估重復(fù)性。

客戶提供信息 

提供該菌株的拉丁文全名。提供菌株的測(cè)序結(jié)果（建議提供全序列而非16S全長(zhǎng)序列）。

案例分享 

案例1：艱難梭菌毒素基因的絕對(duì)定量檢測(cè)（Establishment and application of absolute quantitative PCR method for tedA and tcdB genes of Clostridioides difficile.2025）

通過(guò)對(duì)產(chǎn)毒性艱難梭菌的tedA和tcdB基因進(jìn)行特異性引物和探針設(shè)計(jì)，結(jié)合qPCR技術(shù)，實(shí)現(xiàn)對(duì)產(chǎn)毒性艱難梭菌的高靈敏度和特異性的定量檢測(cè)。該方法具有線性范圍廣、靈敏性高、特異性和可重復(fù)性良好等特點(diǎn)。

 

案例2：ddPCR系統(tǒng)在病原微生物檢測(cè)中的應(yīng)用（Qualitative and quantitative detection of surgical pathogenic microorganisms Escherichia coli and Staphylococcus aureus based on ddPCR system.2021）

利用微滴數(shù)字PCR（ddPCR）系統(tǒng)對(duì)外科病原微生物大腸桿菌和金黃色葡萄球菌進(jìn)行定性和定量檢測(cè)。通過(guò)設(shè)計(jì)針對(duì)特定基因的引物和探針，結(jié)合ddPCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)高精度定量檢測(cè)。研究證明ddPCR系統(tǒng)在血液樣本中具有極高的檢測(cè)準(zhǔn)確性。

ddPCR系統(tǒng)同時(shí)檢測(cè)模擬細(xì)菌血樣(大腸桿菌ATCC25922和金黃色葡萄球菌ATCC25923)的定量結(jié)果。

 

菌株特異性TaqMan探針/引物設(shè)計(jì)及驗(yàn)證是微生物檢測(cè)與定量研究的關(guān)鍵，qPCR探針?lè)ādPCR技術(shù)各有特點(diǎn)，適用于不同場(chǎng)景下的菌株檢測(cè)與定量分析。