大鼠腹動脈采血建議

 1 大鼠腹動脈全血采集方法

1.1 麻醉及固定

將大鼠腹腔注射 10% 水合氯醛以 0.3ml／100g 麻醉，也可用 3% 戊巴比妥納， 0.2ml/100g 體重，注射麻醉劑后，直到身體全身變軟，方可把大鼠仰臥固定在手術(shù)臺上。

1.2 剪開腹部，尋找動脈

“V”字型剪開大鼠腹部皮膚，暴露內(nèi)臟。用小濾紙片輕輕地將腸管及脂肪推向鼠左側(cè)腹部，在脊柱前可見有兩條較大的血管，靠右邊顏色稍白的 1 條就是腹主動脈。為了便于觀察采血量，將鼠按逆時(shí)針方向轉(zhuǎn)動 90°(左手進(jìn)針時(shí)順時(shí)針轉(zhuǎn) 90°) ，取頭部向左橫仰臥位。

1.3 進(jìn)針

將采血針裝好，針尖端向上，在髂骨總動脈分支前方進(jìn)針沿著腹主動脈向心性緩慢向前移動，針尖插入深一些，防止刺破血管壁。由于針尾部分已被密閉乳 膠管包在里面，血液不會自動流出。

1.4 抽血

將所需不同檢測血樣的真空采血管向內(nèi)有針頭的套筒里緩慢地用力，使采血針刺入真空采血管中，血液便會流出，當(dāng)血液量達(dá)到所要求的刻度時(shí)就可以將采 血管拔掉。這時(shí)針頭又回到了膠管中，血液被止住，再用其他采血管進(jìn)行采集， 這樣便可以反復(fù)采集多管的血樣進(jìn)行不同項(xiàng)目的測試。采足血樣后，將針頭退出血管，一般采 3 種血樣全過程只需 2 min。做代謝組檢測時(shí)，一個(gè)樣本需要 1-2ml 全血，之后進(jìn)行血漿或血清處理，具體處理方法可以參照后面方法。

 2 血清

2.1 采集血樣，靜置 1 小時(shí)，血液凝固；

2.2 取液體部分進(jìn)行離心分離，4oC，3000 轉(zhuǎn)每分鐘（rpm），5 分鐘；

2.3 離心后取上層清液 （一般為淡黃色）， 每個(gè)樣本至少需取 500μl 生物量，準(zhǔn)確記錄并進(jìn)行編號。血樣在室溫放置不超過 3 個(gè)小時(shí)，4oC 保存不應(yīng)超過 24小時(shí)，以防止血液中的代謝物發(fā)生變化。

2.4 冰凍樣本，將血清樣本至于-80oC 冰箱冰凍保存。注意事項(xiàng)：

1）采血過程中注意消毒，防止微生物污染；

2）采血時(shí)，如果用酒精消毒，建議擦干擦拭部位，待酒精完全揮發(fā)后，再取樣；

3）采血時(shí)，如果用麻醉劑，建議用異氟醚，防止在 NMR 血清譜圖中出現(xiàn)干擾峰；

4）采集全血時(shí)，如果使用真空采血管，請務(wù)必使用無預(yù)加抗凝劑的凝血管；

5）離心速率建議不宜過快，以免血細(xì)胞破碎；

6）準(zhǔn)確記錄每個(gè)樣本收集的血清樣本體積；

7）血清樣本冰凍后避免反復(fù)凍融；

8）在運(yùn)輸樣本過程提供冰盒干冰保證低溫；

9）血清參考產(chǎn)率：30%-50%，即 1ml 全血大約能得到 0.3-0.5ml 血清。

10）用于 NMR 平臺分析的樣本如果儲存在-80oC 環(huán)境超過 3 個(gè)月，則需要加入微生物抑制劑（建議添加疊氮化鈉溶液（0.0025mol/L）20 微升）；用于 GC-MS、LC-MS 樣本不應(yīng)添加任何微生物抑制劑。

 3 血漿

3.1 采用抗凝管采集全血，NMR 平臺宜用肝素鈉抗凝管，GC-MS、LC-MS 平臺宜 用 EDTA 抗凝管；

3.2 盡快進(jìn)行血漿分離，室溫 3000 轉(zhuǎn)每分鐘（rpm）離心 10 分鐘；

3.3 取上層，0.2ml/管分裝至 1.5ml 離心管中；

3.4 冰凍樣本，將樣本至于-80oC冰箱冰凍保存。足量干冰寄送。注意事項(xiàng)：

1）對于抗凝管的選擇：
代謝組學(xué)實(shí)驗(yàn)檢測推薦使用肝素鈉抗凝管（因?yàn)闄幟仕崾?TCA 循環(huán)中的重要物質(zhì)， 使用檸檬酸鈉抗凝劑會引入外源污染。而 EDTA 會影響 NMR 采譜。但肝素鈉會對 RNA 相關(guān)的實(shí)驗(yàn)有負(fù)面作用，主要是因?yàn)闀种品崔D(zhuǎn)錄酶活性。請根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求選擇合適抗凝管。）

2）分裝保存時(shí)推薦使用 1.5ml 離心管，因?yàn)槁菘趦龃婀芄苊眱?nèi)有一個(gè)橡膠墊圈， 目的是為了密封。但是長期在-80oC 或干冰低溫條件下，橡膠圈墊會變得硬脆， 易脫落，導(dǎo)致密封不嚴(yán)，樣本泄露。

3）血漿參考產(chǎn)率：≈50%，即 1ml 全血大約得到 0.5ml 血漿。